Events Microscopes and Imaging Solutions

Webinar - Uso de la microdisección láser para inducir daño al DNA en células vivas

Date

26/10/2021  11:00 - 12:00

Location

Mexico / Mexico City

Exhibitor

Ponentes: Dr. Alejandro López Saavedra, Dr. Diego Oliva-Rico & Biol. Fernando Luna

Lugar: Unidad de Aplicaciones Avanzadas en Microscopía, ADMiRA (INCan, RAI, UNAM), CDMX, México

Resumen: El DNA genómico es continuamente dañado por diversos factores endógenos o exógenos, como los radicales libres, la radiación UV, la radiación ionizante, entre otros. Una vez que ocurre el daño, el sistema de Respuesta al Daño al DNA (DDR, por sus siglas en inglés) se encarga de detectar, detener el ciclo celular, reparar el daño o inducir apoptosis si este no puede repararse. El DDR está formado por proteínas sensoras, transductoras, adaptadoras y efectoras. La falla en el proceso de reparación del DNA puede llevar a la muerte celular o desencadenar procesos de carcinogénesis.

Para estudiar el daño al DNA se han desarrollado diversas técnicas para generarlo en células vivas cultivadas in vitro. Una de ellas, la microirradiación local con láser UV se usó por primera vez hace más de 40 años para determinar la organización de las regiones cromosómicas y últimamente se ha usado para el estudio del daño al DNA por medio de microscopía confocal principalmente. Sin embargo, esta técnica ha dependido en gran medida del acceso a instrumentos equipados con láser UV y de incubación de células vivas, lo que puede significar un alto costo económico para el investigador.

De manera alternativa, en la Unidad de Aplicaciones Avanzadas en Microscopía del Instituto Nacional de Cancerología y la Red de Apoyo a la Investigación (RAI) estandarizamos un protocolo para generar daño localizado al DNA, sin alterar la viabilidad celular, a través del uso de microscopía de microdisección láser (PALM, ZEISS), típicamente usada para el corte de tejidos fijados sobre laminillas. En lugar de usar un láser UV de microscopía confocal, que por lo general es costoso, se ajusta la potencia y distancia focal del láser de baja energía de microdisección para hacer microirradiación en una región de interés en el núcleo de las células vivas, induciendo así el daño al DNA. Posteriormente, las proteínas involucradas en la vía DDR, o bien cualquier proteína involucrada en daño al DNA que sea de interés para el investigador, pueden ser detectadas por inmunofluorescencia en un microscopio convencional con iluminación epifluorescente.

Link de registro: https://zeiss.ly/incan2021